Recursos y herramientas

Simulador de Espectrofotómetro UV-Vis

Explora el proceso de medición de absorbancia y determina la concentración de una muestra mediante patrones y una curva de calibración.

PRÁCTICA 01 · BIOFARMACIA

Análisis UV-Vis con curva de calibración

Determinación de azul de metileno mediante espectrofotometría UV-Vis y curva de calibración.

LONGITUD DE ONDA660 nm
01 · PREPARACIÓN

Azul de metileno RS

Preparación de la solución de trabajo empleada durante la práctica.

Azul de metileno RS · preparación simulada

Preparación del RS: pesar 50.00 mg de azul de metileno y llevar a un volumen final de 100.00 mL.

Concentración del RS: 50.00 mg / 100.00 mL = 0.500 mg/mL.

Soluciones de trabajo para la curva de calibración

SoluciónAlícuota de RSVolumen finalConcentración calculada
10.10 mL25,00 mL2.00 µg/mL
20.20 mL25,00 mL4.00 µg/mL
30.30 mL25,00 mL6.00 µg/mL
40.40 mL25,00 mL8.00 µg/mL
50.50 mL25,00 mL10.00 µg/mL
Las cinco soluciones se preparan volumétricamente a partir del RS. Las concentraciones se calculan automáticamente a partir del peso y volumen iniciales.
02 · CURVA DE CALIBRACIÓN

Patrones de azul de metileno

Registra la absorbancia obtenida para cada concentración conocida.

Blanco: 0.025
PuntoConcentraciónAbsorbanciaAbsorbancia corregida
12.00 µg/mL0.075
24.00 µg/mL0.175
36.00 µg/mL0.275
48.00 µg/mL0.375
510.00 µg/mL0.475
03 · REGRESIÓN LINEAL

Ecuación de la curva

Variable independiente: concentración de azul de metileno (µg/mL).

Variable dependiente: absorbancia medida a 660 nm.

Pendiente (m): 0.050000

Intercepto (b): -0.025000

Ecuación: y = 0.050000x + -0.025000

Coeficiente de determinación R²: 1.00000

04 · MUESTRA

Determinación de concentración

Selecciona la vía de administración. Los tiempos, las absorbancias y las concentraciones se mostrarán automáticamente en resultados.

05 · RESULTADOS

Perfil de concentración

Resultados calculados para la vía de administración seleccionada.

TiempoAbsorbanciaAbsorbancia corregidaConcentración
5 min0.1200.0952.400 µg/mL
10 min0.1850.1603.700 µg/mL
20 min0.2600.2355.200 µg/mL
30 min0.3100.2856.200 µg/mL
45 min0.2700.2455.400 µg/mL
60 min0.2100.1854.200 µg/mL
06 · CÁLCULOS

Cálculo de concentraciones

Determinación de la concentración de cada muestra a partir de la ecuación de calibración.

ECUACIÓN DE CALIBRACIÓNC = (Areal − b) / m
C = concentración de la muestra (µg/mL)Areal = absorbancia corregida por el blancob = intercepto de la rectam = pendiente de la recta
TiempoSustitución en la ecuaciónConcentración
5 minC = (0.095 − (-0.0250)) / 0.050002.400 µg/mL
10 minC = (0.160 − (-0.0250)) / 0.050003.700 µg/mL
20 minC = (0.235 − (-0.0250)) / 0.050005.200 µg/mL
30 minC = (0.285 − (-0.0250)) / 0.050006.200 µg/mL
45 minC = (0.245 − (-0.0250)) / 0.050005.400 µg/mL
60 minC = (0.185 − (-0.0250)) / 0.050004.200 µg/mL